pvdf膜是可以裁剪的,关于wb原始数据的注意事项可以看图2图3的笔记,详细要点都分享过了,但有些宝还是不太放心裁剪,那就尝试一下图1的方法吧~[举手R]
✅一组数据可以放同一张膜跑,图解:
条带1是input A蛋白,条带2是ip A蛋白;
条带3是input B蛋白,条带4是与A互作的蛋白;
我把input和ip组放一起跑,因为孵育的同种蛋白。
➡️因每个蛋白丰度,抗体效价等不同,深曝光浅曝光的图都要保存,每个条带都保证有合适的曝光度即可,曝光出的条带要清晰可见,但不过曝❗️
✅分别曝光后把裁剪开的膜手动合并为一张膜,再进行曝光,依旧深曝光浅曝光都保存~
✅input如果还要孵育别的蛋白,看条带5的示例。
分子量相近,strip后再孵育别的蛋白;
分子量想远,无需strip,直接孵育一二抗即可。
✅孵育多条带原则:
先孵目的,再孵内参;
先孵效价低的不太好孵育蛋白,再敷容易的。
如果先敷容易的,再strip,不好敷的例如磷酸化蛋白很可能就直接敷不出来了。


