本人一直做线粒体膜蛋白，细胞膜跨膜蛋白，还都是小分子，说点经验给大家～主要是两个问题： 🌟🌟🌟1、膜蛋白能不能煮？样本注意事项？ ✅答案是不确定～由于膜蛋白本身蛋白性质的影响，煮沸后容易聚集，导致在对应位置检测不到，但是亲测并不是所有膜蛋白都这样，不受温度影响的膜蛋白，100度煮沸效果会更好哦‼️ ✅（重点）建议新接触一个跨膜蛋白时，做温度梯度摸下处理条件，然后同时跑胶看蛋白丰度，确定zui佳温度，之后就按此条件处理，尤其是多次跨膜蛋白‼️ ✅图上是用了5～6个温度，检测两个跨膜蛋白的情况（如4图所示）。 ✅跨膜蛋白一般蛋白活性比较强且容易降解，制样时严格添加蛋白酶体抑制剂，冰上处理。 🌟🌟🌟2、膜蛋白如何跑胶？ ✅有些本底含量就低，可上样30～40ug左右。 ✅胶尽可能现配现用，少用预制胶，自配各成分的胶or预混胶都可～ 🌈个人近期在用【普利莱】的高分辨预混胶，效果很不错，图上的结果就是这款胶跑的，跑的小分子跨膜蛋白，marker分的很开，单一浓度能做到梯度胶的效果👍🌈这款配胶试剂盒zui大的特点在于做出了梯度胶的效果，但又可以“现配现用”，不用自己选择浓度啦，大小分子都可以均匀的分离开‼️一般预混胶需要选择不同浓度的胶去做，感觉还挺麻烦的。 ✅对于小分子膜蛋白，建议电压不要太高，上层胶85v，下层胶120～130v即可； 若是预混胶可参考说明书，例如图上的普利莱的胶写可使用200v，跑膜蛋白采用了150v，大概30min跑完全程，完全没问题👌 ✅电泳上样前充分涡旋，涡旋后就不要再离心直接上样！ ✅若蛋白是室温变性，可能样品里有些杂质，跑胶时可先10v电压跑10min，再转正常电压‼️ ⭐️ps: 图上的数据是近期新做的二次检测～之前已经测过确定了zui佳温度，条带都nice。 ⭐️普利莱家的预混胶综合了【不分浓度的把大小蛋白都分离开】➕【现配现用】➕【30min跑完全程】的特点，跨膜蛋白我是基本不用预制胶的，他们家有试用装‼️试用装也很大包，一份可以配好几块胶使用，还外带两包配套的电泳液，尊滴可冲！