如果是买质粒的话，就不需要参考啦。[吧唧R] 但蛮多实验室应该都会涉及到自己构建质粒，尤其是研究方向和生物有关的童鞋～ ✅之前出过关于质粒构建（双酶切法）的详细protocol，可自行翻阅，这次总结了一下同源重组构建质粒的详细流程给大家‼️（很多宝子要） 从载体线性化，到寻找目的基因序列，到设计同源重组的引物到重组反应，转化，菌p，以及最后的测序和比对，验证都有详细列出，希望对大家有些许帮助。🥸 📝此笔记主要内容： 1、载体线性化（同源重组法，可单/双酶切，也可反向pcr） 2、如何寻找目的基因序列？（pubmed） 3、如何设计同源重组法的primer？ 4、后续pcr，产物纯化，重组反应，转化的步骤和注意事项。⚠️ 5、质粒测序返回的结果如何比对？ 如果UU们想要详细的屁屁踢，也可以s我哦，无尝分享。👅 ‼️酶切法如果没成功的宝可以试试同源重组法，酶切法有一定概率切不开，连不上，也是会恼火的～同源重组产物不需要酶切，直接pcr后纯化，然后重组即可。👌 主要是载体线性化的问题，可以选择单or双酶切也可以选择反向pcr，自行选择！ 关于三种使载体线性化的手段主要tips也列出了，根据自己实验需求做就行～