上一篇笔记分享了coip实验几种常见分类，大体上总共分为两种：内源or外源；定性or定量。 这几种实验设计上有些差别，但是收细胞和裂解的过程是一致的（图3已总结） ♻️不同点： ✅1、内源性coip（只定性）：看a和b是否互作。 ip的是目的蛋白，无需定量，只要一抗可以ip下来目的即可，且一抗和beads分开孵育（传统法）。 ✅2、内源性coip（定量看结合趋势）：刺激后，看a和b的互作增强or减弱？ 需定量，使ip目的蛋白量基本一致。方法：收细胞裂解离心，取上清测BCA，每个样都取等量蛋白，加等量抗体即可。（例如都取3mg去ip） ✅3、外源性coip：外转多个蛋白，看c对a和b的互作影响。（a,b,c全部转染） 建议ip标签融合蛋白（Flag,Myc等…做质粒时就提前带上），一般只需➕1ul即可ip下来。但更推荐用偶联标签的纳米抗体去ip，无需一抗和beads分开孵育。[大笑R] ⚠️：无论外源还是内源coip，尤其是与IgG大小类似的目的蛋白，IgG可能掩盖目的蛋白的趋势，这时候如何去除IgG的影响呢？[蹲后续H] 🐡内源coip，建议采用无IgG二抗去除IgG… 🐡外源coip，建议采用纳米抗体去ip，不仅节省时间，而且也无IgG的影响～[喝奶茶R] 🫡例如个人在用的纳米抗体是【天津诺一生物】家的，我ip的是mCherry融合蛋白，除了这个，常用的那些标签蛋白他们都🈶，例如Flag，HA，GFP等等…琼脂糖珠和磁珠随意选择，根据对应纳米抗体的protocol做就行啦！ 🧐纳米抗体的好处： 1、一抗和beads无需分开孵育； 2、可拉Flag，Myc，GFP，mCherry等标签抗体； 3、较短的孵育时间，结合 30-120 min 即可。 4、可去除IgG轻重链。 目的蛋白和IgG轻重链位置相邻的，则使用纳米抗体，个人使用的是【天津诺一生物】家的，还不错，推荐！🤗👍