🫶🏻今天给大家分享的是四环素诱导型质粒的使用，此空载可接目的基因和各类型标签蛋白，例如荧光蛋白GFP，可根据自己需求去选择，但是质粒的用法都是一样的。 🎃激活性系统Tet-on是当四环素不存在时，下游基因表达关闭；当四环素存在时，下游基因表达开启。 🎃而抑制型系统Tet-off与之正相反，当四环素不存在时，下游基因表达；当四环素存在时，下游基因表达关闭。 🎃Tet-On诱导型基因表达载体旨在——当缺乏四环素时，实现目的基因的几乎或完全沉默；当往体系中添加四环素时，目的基因得到快速高水平表达。 🎃常用的四环素诱导浓度范围为0.1-10 μg/mL，不同系统和细胞型对四环素的敏感性不同,需要适当调整浓度。 🧫什么情况下使用这种质粒？ 1.目的蛋白会对细胞的增殖，存活有影响时，无法构建稳株or无法大量阔增稳定细胞株。（比如各种抑癌基因类的蛋白质） 例如：本up主有个蛋白可以直接引起细胞发生死亡，慢病毒导入细胞后，细胞会发生死亡，无法构建稳株，这种情况下也无法做动物成瘤实验。 2.对过表达要求比较高时。 可做四环素诱导型质粒（带目的基因的），稳转进入细胞后进行筛选，使其阳性率达到90～100%，然后加四环素（或其衍生物：多西环素）诱导剂，使其沉默的目的蛋白高表达。 无论是做动物实验还是细胞实验，都是一个很好的细胞模型。 关于如何构建质粒，如何构建稳株，以及其中需要注意的要点，之前都发过，很详细的干货，在【细胞实验】合集，大家可以自行翻阅哦。